急性重症胰腺炎（ａｃｕｔｅ　ｓｅｖｅｒｅ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ，ＡＳＰ）是临床常见的危急重症，具有病情复杂、变化快、容易导致多器官功能衰竭等不良后果，目前治疗方法有限，费用高，预后不佳［１］，寻找疗效确切又价格低廉的治疗药物势在必行。黄芩作为传统中药有悠久历史，最早收载于东汉《神农本草经》，临床上已经采取不同形式应用黄芩治疗涉及多个系统的许多疾病［２］。核因子（ＮＦ－ＫＢ）在缺血再灌注损伤的发展中，对某些促炎症 因 子 基因 的表达起着重 要 的调 节作用［３］，从而减轻损伤。本实验应用黄芩苷治疗ＡＳＰ，观察ＮＦ－ＫＢ和ＩＬ－６等指标的变化，研究黄芩苷对ＡＳＰ时肝损伤的具有何种影响，为临床提供应用的方向。

　　１材料和方法

　　１．１材料

　　黄芩苷（Ｂａｉｃａｌｉｎ）和牛磺胆酸钠由宣城百草植物工贸有限公司和Ｓｉｇｍａ公司出产；兔抗大鼠ＮＦ－ＫＢ多克隆抗体和ＩＬ－６酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）试剂盒为Ｎｅｏｍａｒｋｅｒ公司和晶美生物工程公司产品。成年ＳＤ大鼠４８只（雌雄各半），体重（２４５±１５）ｇ，由佳木斯大学实验动物中心提供。

　　１．２动物分组

　　先将大鼠分为３大组：对照组（Ｃ组），ＡＳＰ组，ＡＳＰ＋黄芩苷治疗组（ＡＳＰ＋Ｂ）。ＡＳＰ＋Ｂ组依黄芩苷用量不同分为２组：ＡＳＰ＋Ｂ－Ｌ（低剂量组）：０．２５ｇ／ｋｇ；ＡＳＰ＋Ｂ－Ｈ（高剂量组）：１．００ｇ／ｋｇ。ＡＳＰＢ各组又分为术后３，６，１２ｈ组。大鼠术前１２ｈ禁食，自由饮水。见表１。

　　１．３试验方法

　　１．３．１动物模型的建立

　　参照文献麻醉大鼠，开腹暴露相应部位，确认胰腺，然后对各组进行分别处理：ＡＳＰ组及ＡＳＰ＋Ｂ组应用５％牛磺胆酸钠逆向注入经过夹闭的胆胰管０．１５～０．２ｍＬ，注射结束继续夹闭３～５ｍｉｎ。Ｃ组以同法给予等量生理盐水。ＡＳＰ＋Ｂ组于建模结束后１ｈ给予应用不同剂量黄芩苷注射液，c组和ＡＳＰ组给予等量生理盐水。

　　１．３．２标本收集

　　各组于建模后处死大鼠，门静脉取血，观察腹腔大体病理改变，并留取胰腺组织和肝脏组织，行甲醛固定。

　　１．３．３指标检测

　　取胰腺和肝组织固定、常规切片，ＨＥ染色；在光学显微镜下观察肝细胞的病理组织学变化。测定３、６、１２ｈ血清谷丙转氨酶（ＡＬＴ）和淀粉酶活性，并用ＥＬＩＳＡ法检测ＩＬ－６。参照文献的方法标记ＮＦ－ＪＢ探针，对肝组织ＮＦ－ＪＢ活性测定［４］，以积分灰度值表示ＮＦ－ＪＢ的活性变化。

　　１．４统计学处理

　　采用ＳＰＳＳ统计软件进行数据分析。实验结果以ｘ±ｓ表示。各组血清ＡＬＴ、ＡＭＰ含量及ＩＬ－６、ＮＦ－ＪＢ活性比较作ｔ检验。

　　２结果

　　２．１应用黄芩苷注射液后各治疗组的血清淀粉酶

　　指标明显低于模型组，但高于对照组 （Ｐ ＜０．０５），但黄芩苷不同剂量组之间的血清淀粉酶的指标差异无统计学意义 （Ｐ ＞０．０５）。应用黄芩苷的各组各时间点血清ＡＬＴ和ＩＬ－６见表２。可见，在术后６ｈ，高剂量的黄芩苷治疗效果较好，但在术后１２ｈ，中等剂量的黄芩苷对肝功能的改善较明显，ＩＬ－６下降幅度明显大于其余各组指标，经测算，其差异具有统计学意义 （Ｐ ＜０．０５）.

　　２．２黄芩苷治疗ＡＳＰ大鼠对肝组织ＮＦ－ＫＢ活性的影响

　　除对照组组外，其余各组组在术后３ｈ肝组织中ＮＦ－ＫＢ存在显着活化，６ｈ后活化程度下降，存在随着时间推移，ＮＦ－ＫＢ活性逐渐下降的趋势，见表３。但在各时段中，对照组活性明显较低 （Ｐ ＜０．０５）。根据黄芩苷应用剂量的高低，各组术后各时段ＮＦ－ＫＢ活化程度出现不同走向，其中，低剂量组和模型组在各时段的数值上低于模型组，但其差异的显着性不具有统计学意义 （Ｐ ＞０．０５）。高剂量组和低剂量组在各时段的差异的显着性均具有统计学意义 （Ｐ＞０．０５）.

　　２．３　 ＡＳＰ大鼠肝组织的大体及微观病理变化

　　对照组大鼠肝呈鲜红色，表面光滑，无渗出及出血；光学显微镜下未见肝小叶、汇管区有明显变化。模型组１２ｈ可见腹腔内大量血性腹水，胰腺水肿、明显坏死，镜下见肝小叶汇管区内大量炎性细胞浸润，局部可见肝细胞坏死样改变。黄芩苷治疗组上述变化较模型组明显减轻。

　　３讨论

　　急性重症胰腺炎（ＡＳＰ）是临床常见的危重病，不仅可以导致沉重的治疗费用，还有较高的致残率和致死率［１］。在急性重症胰腺炎发生发展的过程中，肝脏最常受累，急性重症胰腺炎合并肝损害极为常见。

　　ＡＳＰ发生发展时，蛋白激酶Ｂ（ＰＫＢ）磷酸化水平上升和大量单核细胞的积聚，可以使肝组织中ＮＦ－ＫＢ显着活化［３］，并调节细胞因子的分泌，比如血中ＩＬ－６等含量明显增加，继之参与多种原因引起的组织损伤过程。

　　Ｈｅ等［４］发现诱导大鼠发生急性胰腺炎的１２ｈ内就可以出现肝脏组织的病变，而肺和肾损害不明显，可见肝脏的病变损害非急性胰腺炎的病情有很大影响。急性重症胰腺炎以及并发肝损害全部机制目前尚不十分明确，观点众多。其中，“二次打击”学说较好地阐述了ＡＳＰ的 复 杂 机制［６］。在干扰素的研究中发现，干扰素－γ可以令ＮＦ－ＫＢ升高，影响细胞因子的调节作用是胰腺炎病情加重［７］。还原型谷胱甘肽对其治疗作用也与细胞因子有关［８］。Ｓｔｉｍａｃ等研究发现，ＩＬ－６在急性胰腺炎发展的初期就对病情的发展有不可忽视的影响［９］。而且，通过阻断ＩＬ－６来抑制ＳＴＡＴ－３的活性，明显可以减轻急性重症胰腺的损伤［１０］。本研究结果表明，在应用了黄芩苷治疗后，各时段的ＡＬＴ和ＩＬ－６和ＮＦ－ＫＢ的活性也相应都有所下降，肝胰组织病理改变也较轻。说明黄芩苷对ＡＳＰ所致肝损伤具有一定的治疗或保护作用。其作用机制可能是黄芩苷参与了ＮＦ－ＫＢ的活化、因而减少ＩＬ－６等多种炎症因子的释放，进而改善病情发展。同时可见，在术后６ｈ，高剂量的黄芩苷对ＩＬ－６和ＡＬＴ改善效果较好，但在术后１２ｈ，低剂量的黄芩苷对肝功能也有较好的影响，说明，高低剂量的治疗效果在时间上有所不同。

　　ＮＦ－ＫＢ的活性下降在不同剂量组的不同时段的差异都具有统计学意义。提示：本实验黄芩苷的应用剂量不同影响ＮＦ－ＫＢ的活性，可以推测，剂量不同也可以对下游细胞因子和肝脏功能产生影响。但中药应用有其独特的作用机制，尚不能因此推断黄芩苷可以控制ＮＦ－ＫＢ和细胞因子的调控。同时，由于肝细胞对药物的代谢和转化有影响，肝细胞损伤势必会药物代谢有干扰。在刘兆明等学者对大鼠离体组织的黄芩代谢研究中发现，大鼠的肝脏和肾脏都可以把黄芩苷水解代谢成黄芩素，同时，肝脏、肾脏和小肠、膀胱又可以催化黄芩素生成黄芩苷［１１］。这也是本研究中应用黄芩苷治疗时，出现ＮＦ－ＫＢ和ＩＬ－６等随时段变化不十分一致的原因之一。因此提示，黄芩苷治疗急性重症胰腺炎的过程中作用机制复杂，需要更深入的探索研究。

　　参考文献：

　　［１］芦波，钱家鸣．重症急性胰腺炎病因及发病机制研究进展［Ｊ］．中国实用外科杂志，２０１２，３２（７）：５９０－５９２

　　［２］崔雄，金香子．黄芩苷对大鼠肝损伤的保护作用［Ｊ］．时珍国医国药，２００７，１８（１１）：２７９５

　　［３］赵靖，郑驰，刘曦，等．ＮＦ－ＫＢ与急性重症胰腺炎［Ｊ］．西南军医，２０１３，５（１５）：３２７１－３２７４

　　［４］Ｈｅ　ＺＪ，Ｍａｔｉｋａｉｎｅｎ　ＭＰ，Ａｈｏ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｘｔｒａｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ｏｒｇａｎ　ｉｍ－ｐａｉｍｅｎｔ　ｉｎ　ｃａｅｒｕｌｅｉｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ［Ｊ］．Ａｎｎ　Ｃｈｉｒ　Ｇｙｎａｅｃｏｌ，１９９９，８８（２）：１１２－１１７

　　［５］孟红波，房林，卢少毅，等．干扰素－Ｒ对急性胰腺炎大鼠ＮＦ－ＫＢ及细胞 因 子 的 影 响 ［Ｊ］．同 济 大 学 学 报 （医 学 版），２０１１，４（３２）：１９－２３

　　［６］严吉夫，杨能红，孙诚谊．细胞因子与急性胰腺炎［Ｊ］．现代实用医学，２０１０，２２（１２）：１４１５－１４１７

　　［７］梁坚，周宇，王壮，等．急性胰腺炎肝损害与血清ＩＬ－１８、ＴＮＦ－Ａ、ＮＯ的关系［Ｊ］．南方医科大学学报，２０１０，３０（８）：１９１２－１９１４

　　［８］申振宇，蒋晓峰，孙斌，等．还原型谷胱甘肽对急性胰腺炎肝损害的保护机制［Ｊ］．同济大学学报（医学版），２０１１，３２（１）：７３－７７

　　［９］Ｓｔｉｍａｃ　Ｄ，Ｆｉｇｉｃ　Ｅ，Ｍｉｌｉｃ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ　Ｖａｌｕｅｓ　ｏｆ　ＩＬ－６，ＩＬ－８ａｎｄ　ＩＬ－１０ｉｎ　ａｃｕｔｅ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｇａｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００６，４０（３）：２０９－２１２

　　［１０］Ｃｈａｏ　ＫＣ，Ｃｈａｏ　ＫＦ，Ｃｈｕａｎｇ　ＣＣ，ｅｔ　ａｌ．Ｂｌｏｃｋａｄｅ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ６ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｓ　ａｃｉｎａｒ　ｃｅｌｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ａｎｄ　ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ａ－ｃｕｔｅ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ　ｉｎ　ｖｉｖｏ［Ｊ］．Ｂｒ　Ｊ　Ｓｕｒｇ，２００６，９３（３）：３３２－３３８

　　［１１］刘兆明，马越鸣，王天明，等．黄芩苷与黄芩素在离体大鼠肝、肾、小肠和膀胱中代谢的相互转化［Ｊ］．药学学报，２００８，４３（６）：６６４－６６８

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