快速冷冻是目前病理术中快速诊断应用最广泛的方法之一，但由于冷冻易造成组织细胞的变形、不易做连续切片、不易切成薄片，故冷冻诊断风险性很大。传统的 Feulgen 染色[1]及改良 Feulgen 染色[2]时间长，不适合辅助冷冻快速诊断。本研究使用专业的医疗设备对新鲜组织印片进行Feulgen 染色后，利用全自动 DNA 图像分析系统判定结果，探讨该技术在辅助快速冷冻诊断中的应用价值。
　　
　　1 材料与方法
　　
　　1. 1 材料 选取新鲜的肿瘤组织标本 100 例，其中甲状腺肿瘤 20 例，乳腺肿瘤 20 例，胃肠肿瘤 20 例，肺肿瘤 20 例，子宫肿瘤 20 例，分别做组织印片。
　　
　　1. 2 方法
　　
　　1. 2. 1 冷冻切片 准确选取病变部位，常规行冷冻切片，快速 HE 染色。
　　
　　1. 2. 2 印片细胞学 用载玻片与肿瘤组织切面密切接触，均匀用力在病变组织处按压数次，获取足够数量细胞，制成细胞学印片，自然干燥，丙酮固定 1 min.
　　
　　1. 2. 3 仪器 RHS 组织处理仪[3]（ 意大利 Milestone 公司）可对反应容器抽真空，利用微波加热，磁珠搅拌，使容器内液体均匀受热，提高染色效果。
　　
　　1. 2. 4 快速 Feulgen 染色 5 mol / lHCl 和 DNA 染液（ 武汉兰丁） 放入 RHS 真空微波组织处理仪中预热至60℃，固定后的组织印片先放入经过预热的 5 mol/lHCl 5 min,稍水洗，放入存有 DNA 染液的处理仪中 10 min.常规脱水、透明、中性树胶封固。即将组织印片放入全自动 DNA 图像分析系统判定结果。
　　
　　2 结果
　　
　　对 100 例新鲜肿瘤组织（ 图 1） 印片使用 RHS 真空微波组织处理仪进行快速 Feulgen 染色后，经全自动 DNA 图像分析系统做出的诊断（ 图 2） 与肿瘤组织的快速冷冻病理诊断相符，且经后续常规石蜡切片 HE 染色（ 图 3） 、免疫组化染色诊断（ 图 4） 证实结果准确一致。
　　
　　3 讨论
　　
　　在快速冷冻病理诊断时，镜下短时间内对组织细胞形态进行判定，作出肿瘤良恶性诊断往往比较困难，而细胞 DNA含量及倍体分析可提供重要参考数据。将 DNA 含量分析方法应用于病理诊断，可帮助减少诊断难度、提高诊断水平，现已广泛使用。进行 DNA 含量及倍体分析，在时间上不会增加多少，如在印片上能够确切获得较多的多倍体细胞，尤其是有异倍体细胞存在时，无论其细胞形态上如何变化，都可视为判定恶性肿瘤的一个最为有力的证据[4].但是传统Feulgen 染色通常需耗时 > 2 h,因此不适用于辅助快速病理诊断。改良的快速 Feulgen 染色方法，能使这一要求成为可能。RSH 真空微波组织处理仪通过微电脑控制微波的发射功率及红外线精确控制温度，结合 100 mbar 真空环境，使细胞核更快着色，在磁力搅拌子的作用下比用普通微波炉染色过程更稳定，重复性更高。而且组织印片制作简便，印片中的细胞都有完整细胞核，没有通常切片中出现的不完整细胞核，DNA 含量检查所获结果更能反映瘤细胞 DNA 含量。组织印片使用医用 RHS 真空微波处理仪行快速 Feulgen 染色，再结合全自动 DNA 图像分析系统，可以成为快速冷冻病理诊断中的一种重要辅助诊断手段。
　　
　　参考文献：
　　
　　[1] 金日男，夏潮涌。 三种 Feulgen 染色方法的比较[J]. 中国体视学与图像分析 ,2006,11（ 1） : 39 -44.
　　
　　[2] 芮菊生，杜懋琴，陈海明，等。 组织切片技术[M]. 北京： 人民教育出版社，1980.213 -217.
　　
　　[3] 王 萍，朱建平。 快速微波技术在骨组织脱钙中的应用[J].诊断病理学杂志，2012,19 （ 1） : 75.
　　
　　[4] 赵久飞，任 力，李 炜，等。 术中组织印片细胞 DNA 倍体分析在乳腺疾病诊断中的意义[J]. 诊断病理学杂志，2013,20（ 12） : 744 -747.

 

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