摘  要：　目的:测定蒙药消肿九味散中大黄酸、大黄素、大黄酚3种活性成分的含量。方法:采用高效液相色谱 (HPLC) 法, Dimaonsil-C18 (250 mm×4.6 mm, 5μm) 色谱柱;以甲醇-0.1%磷酸溶液 (85∶15) 为流动相;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:254 nm, 柱温为25℃。结果:大黄酸、大黄素、大黄酚3种成分分别在0.101 80.508 8μg、0.117 00.585 0μg、0.256 01.280 0μg范围内与其峰面积呈良好的线性关系, 相关系数均大于0.9997;且样品中3种成分的平均加样回收率 (n=6) 分别为98.98%、99.54%、97.36%, RSD均小于1.32%。结论:建立的含量测定方法简便、快速、灵敏、准确, 可以从该制剂中原料药材君药的角度用于该制剂的质量控制。

　　关键词：　消肿九味散; 大黄酸; 大黄素; 大黄酚; HPLC法;
 

　　Abstract：　Objective:To determinate the contents of three active ingredients in Mongolian medicine of Xiaozhong Jiuwei Powder, including rheinic acid, rheum emodin and chrysophanol.Methods:High Pressure Liquid Chromatography (HPLC) was adopted, using the Dimaonsil-C18 (250mm × 4.6mm, 5μm) as chromatographic column with 25 ℃, methanol-0.1% phosphoric acid solution (85:15) as mobile phase.The flow rate was 1.0 mL · min-1and detection wavelength was 254 nm.Results:The three ingredients of rheinic acid, rheum emodin and chrysophanol showed good linear relation with their peak areas within the limits of 0.1018 ~ 0.5088 μg (r = 0.9997) , 0.1170 ~ 0.5850 μg (r = 0.9997) and 0.2560 ~ 1.2800 μg (r = 0.9998) , respectively.All their correlation coefficients were greater than 0.9997.The mean recovery of 98.45% (1.32%) for rheinic acid, 99.60% (1.09%) for rheum emodin and97.36% (1.17%) for chrysophanol were obtained (n =6) , and all the RSD values were less than1.32%.Conclusion:The method established in this study is simple, high accuracy, precision and specific, and thus it can be used to control the quality of preparation perspective from monarch drug in a crude medicinal materials of a prescription.

　　Keyword：　Xiaozhong Jiuwei Powder; rheinic acid; rheum emodin; chrysophanol; HPLC;

　　蒙药消肿九味散由大黄、京大戟、翻白草、玉竹、姜黄、水菖蒲、生草乌、天门冬等八味原料药材组成, 但处方中大黄2份, 故称“九味散”。具有退热、消肿、止痛功能;用于急性腮腺炎、淋巴结炎、皮下及深部脓肿、丹毒、红肿热痛、风湿寒痹、关节疼痛等症。为蒙古族临床常用药并且疗效较佳[1]。该制剂尚未见具有活性成分含量测定的研究报道, 尤其是原料药材中大黄为主药, 其商品在市场上时有伪劣品出现, 因此本文采用高效液相色谱法同时测定该制剂中大黄酸、大黄素、大黄酚3个成分的含量, 并为该制剂提供了快速、准确、可靠的有关成分测定方法, 为其质量控制提供了新的技术方法。

　　1、 仪器与材料

　　LC-10AT高效液相色谱仪 (日本岛津) , SPD—10AVP检测器 (日本岛津) , N3000色谱工作站 (浙江大学智能信息研究所) , Dimaonsil-C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm, 5μm, 迪马公司) , ADW220D型电子分析天平 (日本岛津) , KQ-100超声波清洗器 (昆山市超声波仪器有限公司) 。

　　蒙药消肿九味散分别由内蒙古科尔沁药业有限公司、内蒙古库伦蒙药厂、内蒙古乌兰浩特中蒙制药有限公司提供 (批号:20130118、121014、121226) ;大黄酸、大黄素、大黄酚对照品 (批号:0757-200506、0756-200510、0796-200408) 均购自中国食品药品检定研究所。甲醇为色谱纯;水为高纯水;所用试剂均为分析纯。

　　2、 方法与结果

　　2.1、 色谱条件[2-8]

　　色谱柱:Dimaonsil-C18 (250 mm×4.6 mm, 5μm) ;流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液 (85∶15) ;流速:1.0 m L·min-1;检测波长:254 nm, 柱温为25℃;进样量:10μL。

　　2.2、 对照品溶液的制备

　　精密称取大黄酸、大黄素及大黄酚适量, 分别置量瓶中, 加甲醇溶解、摇匀, 分别制成81.4μg/m L、46.8μg/m L、512μg/m L的对照品贮备液。分别精密吸取上述对照品溶液配成大黄酸、大黄素、大黄酚为40.7μg/m L、46.8μg/m L、102.4mg/m L的混合对照品溶液。

　　2.3、 供试品溶液的制备

　　取消肿九味散约2.0 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇25 m L, 称定重量, 加热回流1 h, 放冷, 再称定重量, 用甲醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液5 m L, 置烧瓶中, 挥去溶剂, 加8%盐酸溶液10 m L, 超声5 min, 再加三氯甲烷10 m L, 加热回流1h, 放冷, 置分液漏斗中, 用少量三氯甲烷洗涤容器, 并入分液漏斗中, 分取三氯甲烷层, 酸液再用三氯甲烷提取3次, 每次10 m L, 合并三氯甲烷液, 减压回收溶剂至干, 残渣加甲醇使溶解, 转移至10 m L量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得。同样另取缺大黄阴性对照品约1.6 g, 照供试品溶液的制备方法制备, 即得。

　　2.4、 干扰试验

　　精密吸取对照品溶液、供试品溶液、缺大黄的阴性对照品溶液各10μL, 分别注入液相色谱仪, 结果供试品溶液色谱图中与对照品相应的位置上, 分别有大黄酸、大黄素、大黄酚的吸收峰, 而缺大黄的阴性对照品溶液色谱图无干扰色谱峰, 结果见图1。

　　图1 对照品, 消肿九味散与缺大黄阴性样的HPLC图


 

　　2.5、 考察线性关系

　　精密吸取混合对照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5μL注入液相色谱仪, 记录色谱图, 测定其峰面积 (A) 。并以峰面积 (Y) 对混合对照品的进样量 (X) 进行线性回归, 得回归方程依次为:Y1=2.271×106X8.549×103, r=0.9997;Y2=1.918×106X7.800×103, r=0.9997;Y3=2.753×106X 1.069×104, r=0.9998。结果表明, 大黄酸、大黄素、大黄酚在0.1018~0.5088μg、0.1170~0.5850μg、0.2560~1.2800μg范围内, 与峰面积具有良好的线性关系。

　　2.6、 精密度试验

　　精密吸取“2.3”项下的供试品溶液10μL, 重复进样6次, 结果峰面积的RSD分别为1.13%、0.98%和0.82%。表明仪器的测定精密度良好。

　　2.7、 稳定性试验

　　精密称取同一批样品 (批号121014) , 按“2.3”项下的方法制备供试品溶液6份, 分别于0、2、4、6、8、10 h注入液相色谱仪, 测定, 计算, 结果3种成峰面积的的RSD分别为0.69%、1.67%和1.45%。结果表明供试品溶液中该3种成分在10 h内稳定性良好。

　　2.8、 重复性试验

　　精密称取同一批样品约2.0 g, 照供试品溶液制备方法制得供试品溶液6份, 分别精密吸取10μL, 注入液相色谱仪, 测定, 计算, 结果3种成分峰面积的RSD分别为1.10%、1.52%和1.74%。表明该含量测定方法具有良好的重复性。

　　2.9、 回收率试验

　　取已知含量的样品约1.0 g, 计6份, 精密称定, 分别加入一定量的对照品溶液, 照供试品溶液制备方法制得供试品溶液, 并计算回收率, 结果大黄酸、大黄素、大黄酚平均回收率为98.98%、99.54%、97.36%, RSD分别为1.32%、1.09%、1.15%。结果见表1。

　　2.1 0、 样品测定

　　分别称取3批样品约2.0 g, 每批6份, 照供试品溶液制备方法制得供试品溶液。精密吸取供试品溶液10μL, 注入液相色谱仪, 测定其峰面积值, 计算大黄酸、大黄素、大黄酚的含量。结果见表2。

　　表1 消肿九味散加样回收率试验 (n=6)

　　注:*大黄酸0.0814 mg/m L×10 m L=0.8140 mg;大黄素0.468 mg/m L×1.5m L=0.7020mg;大黄酚0.512 mg/m L×3 m L=1.5360 mg。

　　表2 消肿九味散含量 (n=6)

　　3、 讨论

　　蒙药消肿九味散由大黄、京大戟、翻白草、玉竹、姜黄、水菖蒲、生草乌、天门冬等药材组成, 为确保疗效及提高药品质量, 我们采用HPLC法对君药中的大黄酸、大黄素、大黄酚进行了含量测定。试验结果表明, 该方法简便、快捷、准确、重复性好, 大黄酸、大黄素、大黄酚的平均回收率分别为98.98%、99.54%、97.36%, RSD分别为1.32%、1.09%、1.15% (n=6) , 为该药质量控制提供了新的技术方法与质量指标。

　　在本试验所确定的色谱条件下, 大黄酸、大黄素、大黄酚均基线分离 (R>1.5) ;T (0.95~1.05) ;理论板数按大黄素峰计算不低于3000。

　　参考文献：

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