摘要：运用正相和反相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、大孔吸附树脂柱色谱、反相高效液相色谱等分离和纯化方法， 从蜘蛛香乙酸乙酯部位中共分离得到173个化合物。应用一维和二维NMR, UV, IR, MS等波谱方法鉴定了它们的结构， 化合物类型涉及环烯醚萜、倍半萜、单萜、三萜、木脂素、黄酮、简单芳香类等， 其中新化合物77个。前期已对68个新化合物和25个已知化合物进行了报道。该文报道余下9个新化合物 （19） 和71个已知化合物的分离和结构鉴定， valeriotriate A （8a） 的结构修正， 以及肿瘤细胞毒活性筛选。

　　关键词：败酱科； 蜘蛛香； 化学成分； 细胞毒；

　　Abstract:Application of a combination of various chromatographic techniques including column chromatography over silica gel, Sephadex LH-20, macroporous adsorbent resin, and reversed-phase HPLC, led to the isolation of 173 compounds including irdidoids, monoterpenes, sesquiterpenes, triterpenes, lignans, flavonoids, and simple aromatic derivatives from the ethyl acetate-soluble fraction of the whole plants of Valeriana jatamansi （Valerianaceae） , and their structures were elucidated by spectroscopic methods including 1D, 2D NMR UV, IR, and MS techniques.Among them, 77 compounds were new.In previous reports, we have described the isolation, structure elucidation, and bioactivities of 68 new and 25 known compounds.As a consequence, we herein reported the isolation and structure elucidation of the remaining 9 new and 71 known compounds, the structure revision of valeriotriate A （8a） , as well as cytotoxicity of some compounds.

　　Keyword:Valerianaceae; Valeriana jatamansi; chemical constituents; cytotoxicity;

　　败酱科Valerianaceae缬草属Valeriana植物全世界约有200多种， 该属多种植物的根部提取物， 又名缬草制剂， 作为传统的温和镇静剂使用已有上百年历史[1].蜘蛛香V.jatamansi Jones （同名为V.wallichii DC.） , 主产于中国和印度， 药用历史悠久， 始载于《本草纲目》， 2015年版药典 （一部） 也加以收载， 具有理气和中， 镇静止痛， 散寒除湿， 活血消肿等功效， 用于安神， 失眠， 毒虫咬伤， 皮肤病等疾病的治疗[2,3].早期药理活性研究表明， 蜘蛛香乙醇和水提取物除了具有镇静活性外， 还显示出较强的细胞毒和抗肿瘤活性[4].为了从蜘蛛香中寻找更多的活性物质或先导化合物， 作者对蜘蛛香乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位的化学成分进行了系统的研究， 从中分离鉴定了173个化合物， 主要为含有多个酰氧基团或氯原子取代的环烯醚萜类， 此外还包括少量的倍半萜类、黄酮、木脂素和其他类成分， 其中新化合物77个。前期已对68个新化合物和25个已知化合物的结构和活性进行了报道[5,6,7,8,9,10,11,12,13].本文报道余下9个新化合物 （1~9） 和71个已知化合物的分离和结构鉴定， 以及valeriotriate A （8a） 的结构修正。体外肿瘤细胞毒活性筛选发现单萜衍生物25, 27和28对肺腺癌 （A549） , 前列腺癌 （PC-3 M） , 结肠癌 （HCT-8） 有较强的抑制作用， IC50为2.8~10.4μmol·L-1, 而对肝癌 （Bel 7402） 细胞株有弱的抑制作用， IC50为14.0~31.9μmol·L-1.

　　1 材料

　　1D和2D NMR在Bruker Avance 600核磁共振仪上测定， 以TMS作为内标。Agilent LC/MSD Trap XCT质谱仪。GF254薄层色谱硅胶板及制备型GF254薄层色谱硅胶板均为烟台汇友硅胶发展公司产品；凝胶Sephadex LH-20 （40~70μm） 为瑞典Amersham Pharmacia Biotech AB公司产品；反相填充材料YMC-GEL ODS-A （50μm） 为美国YMC公司产品。中压液相色谱仪 （Búchi Gradient Former B-687, Rp C18, 43~60μm, Pharmacia公司） .HPLC制备用Waters 600高效液相色谱仪， Kromasil ODS半制备色谱柱 （10 mm×300 mm, 5μm） , PDA紫外检测器。

　　蜘蛛香药材于2007年6月采自贵州高坡县， 由贵阳中医学院何顺治教授鉴定为蜘蛛香V.jatamansi的干燥全草， 标本现存于第二军医大学药学院天然药物化学教研室， 标本号为No.2007-08-16.

　　2 提取分离

　　干燥的蜘蛛香全草 （8.5 kg） , 粉碎后用95%乙醇渗滤4 d.渗滤液减压浓缩成浸膏后将其混悬于水中， 用乙酸乙酯萃取5次， 每次3 000 m L;减压回收溶剂后乙酸乙酯部位 （420 g） 和水相部位 （315 g） .

　　乙酸乙酯部分进行正相硅胶 （1 500 g） 柱色谱分离， 用石油醚-丙酮 （100∶0~丙酮） ~90%乙醇进行梯度洗脱， 洗脱液经薄层色谱检测， 合并相似组成的洗脱液， 回收溶剂得Ⅰ~Ⅹ10个洗脱部分。第Ⅱ~Ⅹ洗脱部分通过反复硅胶柱色谱， Sephadex LH-20凝胶柱色谱， RP-18反相柱色谱， 制备薄层色谱和反相HPLC制备等技术， 除了获得的前面报道的化合物外， 从中还分离得到9个新化合物为1 （4.6 mg） , 2 （1.3 mg） , 3 （13.7 mg） , 4/5 （4.8 mg） , 6 （6.5 mg） , 7 （0.6 mg） , 8 （4.4 mg） 和9 （10.1 mg） ;和71个已知化合物为10 （8.7 mg） , 11 （6.3 mg） , 12 （7.7 mg） , 13 （6.8 mg） , 14 （89.4 mg） , 15 （12.5mg） , 16 （3.2 mg） , 17 （4.3 mg） , 18 （8.1 mg） , 19 （2.6 mg） , 20 （7.2 mg） , 21 （1.1 mg） , 22 （2.0 mg） , 23 （2.5 mg） , 24 （1.3 mg） , 25 （16.8 mg） , 26 （15.7mg） , 27 （3.6 mg） , 28 （1.2 mg） , 29 （3.5 mg） , 30 （352.9 mg） , 31 （21.5 mg） , 32 （3.9 mg） , 33 （5.8mg） , 34 （4.9 mg） , 35 （3.1 mg） , 36 （125.8 mg） , 37 （2.1 mg） , 38 （4.9 mg） , 39 （17.5 mg） , 40 （6.2 mg） , 41 （32.3 mg） , 42 （65.9 mg） , 43 （3.6 mg） , 44 （1.8mg） , 45 （1.6 mg） , 46 （1.1 mg） , 47 （5.2 mg） , 48 （1.8 mg） , 49 （1.1 mg） , 50 （1.0 mg） , 51 （1.2 mg） , 52 （1.1 mg） , 53 （1.4 mg） , 54 （8.9 mg） , 55 （9.1mg） , 56 （1.5 mg） , 57 （9.2 mg） , 58 （1.1 mg） , 59 （2.8 mg） , 60 （0.8 mg） , 61 （1.1 mg） , 62 （0.5 mg） , 63 （10.2 mg） , 64 （21.1 mg） , 65 （1.8 mg） , 66 （7.6mg） , 67 （351.6 mg） , 68 （1.1 mg） , 69 （1.0 mg） , 70 （1.9 mg） , 71 （2.0 mg） , 72 （9.9 mg） , 73 （1.2 mg） , 74 （4.2 mg） , 75 （3.9 mg） , 76 （8.2 mg） , 77 （4.2mg） , 78 （179.5 mg） , 79 （238.7 mg） , 80 （7.8 mg） .

　　3 结构鉴定

　　化合物1为黄色油状物， [α]D20+102.0 （c0.11, Me OH） .IR光谱显示分子中有羟基 （3 462cm-1） 和羰基 （1 736 cm-1） 官能团。根据正离子模式HR-ESI-MS得到的精确相对分子质量m/z425.136 2[M+Na]+, 确定其分子式为C19H27Cl O7 （计算值425.134 3, C19H27Cl O7Na） , 不饱和度Ω=6.分析化合物1的1H和13C-NMR谱可以归属出1组isovaleroxy, 1组acetoxy和1个乙氧基的NMR共振信号。剩余的10个碳信号根据DEPT谱可归属为2个亚甲基碳 （δC60.8和50.3） 、5个次甲基碳 （δC98.1, 91.7, 143.2, 130.8和46.8） 和3个季碳 （δC144.0, 126.2和82.8） .上述数据结合典型的氯甲基NMR信号[δH3.79, 3.71 （1H each, d, J=11.6 Hz） ;δC50.3][9]推断化合物1为含有2个双键和10-氯取原子代的缬草三酯 （环烯醚萜） 类化合物。其中δH6.78, 6.30 （1H each, d, J=5.4 Hz, H-7和H-6） 为二取代的烯键质子信号， 并在HMBC谱中可看到δH6.78的烯键质子与C-9和C-10有相关， 确定该双键位于C-6, C-7位上。δH6.32 （1H, d, J=7.2 Hz） 和δH5.29 （1H, s） 可归属为H-1和H-3半缩醛质子， 因为在HMBC谱中， δH6.32 （H-1） 质子与δC91.7 （C-3） , 144.0 （C-5） , 82.8 （C-8） 和46.9 （C-9） 有相关， 而δH5.29 （H-3） 质子与δC98.1 （C-1） , 126.2 （C-4） , 144.0 （C-5） , 和60.8 （C-11） 有相关， 从而确定另一个四取代双键只能位于C-4, C-5位上。此外， 在HMBC谱中还可看到H-1和isovaleroxy取代基的羰基碳δC171.9有远程相关；H-3和乙氧基中的δC64.1碳信号有远程相关；H2-11与乙酰基的羰基碳δC171.0有远程相关， 从而确定isovaleroxy, 乙氧基和acetoxy取代基分别与C-1, C-3和C-11相连。因此， 根据上述数据确定了化合物1的平面结构， 并通过1H-1H COSY, HSQC和HMBC实验对所有的C, H信号进行了准确归属。NOESY谱中， H-9与H2-10有相关， 而H-1与H-3, 8-OH有相关， 同时结合生源途径， 推断化合物1与前面报道的环烯醚萜类中的C-1, C-3, C-8和C-9的构型完全一致[5,6,7,8,9].因此， 根据上述推断确定化合物1的结构见图1, 相应数据见表1, 并命名为chlorovaltrate P.

　　【图1 化合物1~8, 8a, 9, 25, 27和28的结构】

　　化合物2与前期报道的jatamanvaltrate U具有相同的分子式， 而且它们的1H和13C-NMR谱非常相似， 见表1, 2[8], 进一步分析化合物2的2D NMR数据， 确定化合物2与jatamanvaltrate U也具有相同的平面结构。比较两者的13C-NMR谱， 发现它们的C-6化学位移有明显差异， 前者比后者向低场位移Δδ4.8, 因此， 推断化合物2为jatamanvaltrate U的C-6差向异构体。化合物2的NOESY谱中， H-6与H-9有相关也证实了上述推断， 即H-6为β构型， 由此确定化合物2的结构见图1, 并命名为jatamanvaltrate U1.

　　化合物3为黄色油状物， 其与报道的jatamanvaltrate U的NMR数据非常相似[8], 主要差别是化合物3比jatamanvaltrate U多了1个乙氧基信号， 而isovaleroxy取代基信号消失， 推测与化合物3中C-1相连的为乙氧基， 而不是isovaleroxy, 这一推断得到3的HMBC谱实验数据的证实。在HMBC谱中可以清晰看到H-1和其中1个乙氧基碳δC65.2有远程相关。因此， 根据上述数据确定了化合物3的平面结构， 并通过1H-1H COSY, HSQC和HMBC实验对所有的C, H信号进行了准确归属。根据H-1的偶合常数J=8.4 Hz, 说明H-1与H-9处于反式。NOESY谱中， H-9与H2-10和C-6乙氧基的CH2有相关， 而H-1与H-3无相关， 同时结合化学位移值和生源途径， 推断化合物3与前面报道的jatamanvaltrate U的C-1, C-3, C-6和C-9的构型完全一致[5,6,7,8,9].因此， 根据上述推断， 确定化合物3的结构见图1, 并命名为jatamanvaltrate U2.

　　【表1 化合物1~9的1H-NMR数据】

　　注：1） 1H-NMR （600 MHz） , 偶合常数 （J） 在括号中， 依据DEPT, 1H-1H COSY, HSQC和HMBC对信号归属；2） 化合物6的C-7处β- （acetoxy） isovaleroxy[δ3.01, 2.79 （each 1H, d, J=14.4 Hz, HR7-2） , 1.52 （3H, s, HR7-4） , 1.50 （3H, s, HR7-5） , 1.96 （3H, s, HR7-7） ];3） 化合物8的C-7处[δ2.03 （3H, s, HR7-2） ;α- （isovaleroxy） isovaleroxy group连接在化合物8的11位：δ4.84 （1H, d, J=4.8 Hz, HR11-2） , 2.24 （1H, m, HR11-3） , 1.01 d （6H, d, J=6.6 Hz, HR11-4and HR11-5） , 2.28 H （2H, m, HR11-7） , 2.10 （1H, m, HR11-3） , 0.97 （6H, d, J=6.6 Hz, HR11-9and HR11-10） ].

　　【表2 化合物1~6, 8和9的13C NMR数据】

　　注：1） 13C-NMR （150 MHz） , 依据DEPT, 1H-1H COSY, HSQC和HMBC对信号归属；2） 化合物8的C-11处α- （isovaleroxy） isovaleroxy[δ170.7 （CR11-1） , 77.8 （CR11-2） 31.3 （CR11-3） , 19.7 （CR11-4） , 18.0 （CR11-5） , 173.5 （CR11-6） , 44.0 （CR11-7） , 27.0 （CR11-8） , 23.2×2 （CR11-9, CR11-10） ].

　　化合物4和5为一对混合物， 比例约为3∶1.它们的HR-ESI-MS显示它们与3具有相同的分子式。进一步的1D和2D NMR数据分析表明4和5与3具有完全相同的平面结构， 表明它们互为差向异构体。与化合物3的1H-NMR谱相比， 化合物4和5中H-1的分别向低场位移了ΔδH0.78和ΔδH0.68, 而H-1的偶合常数均为3.6 Hz, 说明化合物4和5中H-1与H-9处于顺式。在NOESY谱中也显示出H-9和H-1的强相关。最后根据两者的NOESY谱， 化合物4中H-1与H-3无NOE相关， 而化合物6中H-1与H-3有NOE相关， 同时结合化学位移值和生源途径， 确定化合物4和5的结构见图1, 并分别命名为jatamanvaltrate U3和jatamanvaltrate U4.

　　化合物6的NMR数据与同时分离得到的已知化合物jatamanvaltrate K非常相似[5], 仅比jatamanvaltrate K多了1组乙氧基信号。进一步分析化合物6的2D NMR数据， 确定化合物6与jatamanvaltrate K的C-1, C-7和C-11的取代基完全一致， 即均分别与isovaleroxy, β- （acetoxy） isovaleroxy和acetoxy取代基相连， 而乙氧基与C-10相连。因此， 化合物6的结构确定为10-O-ethyl-jatamanvaltrate K.

　　化合物7为微量成分。其与共存的nardostachin的1H-NMR谱非常相似[14], 进一步比较它们的1H-NMR谱发现化合物nardostachin中8位的甲基双峰[δH1.10 （3H, d, J=7.2 Hz, Me-8） ]在化合物7中变成甲基单峰[δH1.40 （3H, s, Me-8） ], 并向低场位移了Δδ0.3, 同时根据化合物7的HR-ESI-MS数据给出的分子式比nardostachin多1个氧原子， 因此推测化合物7的C-8位被羟基取代。最后根据NOESY谱中H-5与8-Me和H-9的相关峰， H-7与H-6α的相关峰， 确定化合物7的结构为8-hydroxynardostachin, 见图1.

　　化合物8在氘代丙酮中测定的NMR数据与文献报道的、从蜘蛛香分离得到的valeriotriate A （8a） 的NMR数据完全一致[15], 说明它们应为同一化合物。文献报道valeriotriate A中的乙氧基与C-8相连， 但C-10的化学位移与分离得到的C-10连有甲氧基的类似化合物jatamanvaltrate E的化学位移相近 （前者为δC75.2, 后者为δC75.3） [5,15], 所以valeriotriate A中的乙氧基应该与C-10相连更为合理。化合物8的HMBC谱显示的H2-10与乙氧基的亚甲基碳的远程相关也支持上述推断。化合物8的NOESY谱中， H-7与H-6α有相关， H-9与H-6β和H2-10有相关， H-1与H-9和H2-10有相关， 说明化合物8中的环稀醚萜母核与前面报道的类似化合物的构型相同， 即8位的构型与文献报道的valeriotriate A构型相反。综上所述， valeriotriate A （8a） 的正确结构应为化合物8所示的结构， 见图1.

　　化合物9为浅黄色固体， [α]D20+42.6 （c 0.12, Me OH） .IR光谱显示分子中有羟基 （3 502, 3 468cm-1） 和羰基 （1 738 cm-1） 官能团。根据正离子模式HR-ESI-MS得到的精确相对分子质量m/z287.110 3[M+Na]+, 确定其分子式为C11H20O7 （计算值287.110 7, C11H20O7Na, ） .化合物9的13C-NMR和DEPT给出1组典型的葡萄糖信号外[δC95.3, 73.7, 78.5, 70.8, 77.6, 62.2 （C-1, 2, 3, 4, 5, 6） ], 还给出1组isovaleryl信号。此外， 葡萄糖端基氢向低场位移至δH5.44 （d, J=7.8 Hz） , 说明isovaleryl与葡萄糖的OH-1相连。HMBC谱中的显示H-1与isovaleryl中羰基碳δC173.4的相关也证实上述推断。根据葡萄糖端基氢的J1, 2=7.8 Hz, 说明葡萄糖的构型为β构型。由化合物给出的旋光值， 确定其结构为isovalerylβ-D-glucoside.

　　4 谱学数据

　　化合物1无色油状物；[α]D20+102.0 （c 0.11, Me OH） ;ESI-MS m/z 425[M+Na]+, 401[M-H]-;HR-ESI-MS m/z 425.136 2[M+Na]+ （计算值425.134 3, C19H27Cl O7Na） ;IR （KBr） νmax3 462, 2 961, 1 736, 1 640, 1 611, 1 423, 1 365, 1 231, 1 100cm-1;1H-NMR （Me2CO-d6, 600 MHz） 和13C-NMR （Me2CO-d6, 150 MHz） 数据， 见表1, 2.

　　化合物2黄色油状物；[α]D20-51.0 （c 0.25, Me OH） ;ESI-MS m/z 379[M+Na]+, 391[M+Cl]-;HR-ESI-MS m/z 391.155 3[M+Cl]- （计算值391.152 4, C18H28O7Cl, ） ;IR （KBr） νmax2 968, 2 860, 1 736, 1 680, 1 523, 1 460, 1 363, 1 216, 1 068cm-1;1H-NMR （Me2CO-d6, 600 MHz） 和13C-NMR （Me2CO-d6, 150 MHz） 数据， 见表1, 2.

　　化合物3无色油状物；ESI-MS m/z 379[M+Na]+, 391[M+Cl]-;HR-ESI-MS m/z 391.156 1[M+Cl]- （计算值391.152 4, C18H28O7Cl） ;1H-NMR （Me2CO-d6, 600 MHz） 和13C-NMR （Me2CO-d6, 150 MHz） 数据， 见表1, 2.

　　化合物4/5无色油状物；[α]D20+52.2 （c0.12, Me OH） ;ESI-MS m/z 491[M+Na]+, 503[M+Cl]-;HR-ESI-MS m/z 491.227 1[M+Na]+ （计算值491.225 7, C24H36O9Na） ;UV （Me OH） λmax （logε） 223 （4.12） , 254 （4.01） nm;IR （KBr） νmax2 972, 2 876, 1 734, 1 690, 1 528, 1 460, 1 373, 1 226, 1 068 cm-1;1H-NMR （Me2CO-d6, 600 MHz） 和13C-NMR （Me2CO-d6, 150 MHz） 数据， 见表1, 2.

　　化合物6无色油状物；[α]D20+74.2 （c 0.15, Me OH） ;ESIMS m/z 549[M+Na]+, 561[M+Cl]-;HR-ESI-MS m/z 549.232 9[M+Na]+ （计算值549.231 2, C26H38O11Na） ;UV （Me OH） λmax （logε） 223 （4.12） , 254 （4.02） nm;IR （KBr） νmax2 970, 2 872, 1 736, 1 693, 1 528, 1 466, 1 375, 1 228, 1 072cm-1;1H-NMR （CDCl3, 600 MHz） 和13C-NMR （CDCl3, 150 MHz） 数据， 见表1, 2.

　　化合物7无色油状物；[α]D20-58.2 （c 0.04, Me OH） ;ESI-MS m/z 407[M+Na]+, 419[M+Cl]-;HR-ESI-MS m/z 407.203 3[M+Na]+ （计算值407.204 6, 分子式C20H32O7Na, ） ;IR （KBr） νmax3 452, 2 970, 2 862, 1 738, 1 477, 1 364, 1 226, 1 086cm-1;1H-NMR （Me2CO-d6, 600 MHz） 数据， 见表1.

　　化合物8无色油状物；[α]D20-39.9 （c 0.12, Me OH） ;ESI-MS m/z 609[M+Na]+, 585[M-H]-;UV （Me OH） λmax （logε） 213 （3.92） nm;IR （KBr） νmax2 962, 2 876, 1 736, 1 680, 1 462, 1 390, 1 240, 1 172, 1 108cm-1;1H-NMR （Me2CO-d6, 600 MHz） 和13C-NMR （Me2CO-d6, 150 MHz） 数据， 见表1, 2.

　　化合物9黄色固体；[α]D20+42.6 （c 0.12, Me OH） ;ESI-MS m/z 287[M+Na]+, 263[M-H]-;HR-ESI-MS m/z 287.110 3[M+Na]+ （计算值287.110 7, C11H20O7Na） ;IR （KBr） νmax 3 502, 3 468, 1 738 cm-1;1H-NMR （Me OD, 600 MHz） 数据， 见表1, 2.

　　化合物10~80经理化特征， MS数据， 1H和13C-NMR数据与文献报道的数据对照分析， 以及借助部分2DNMR分析， 确定化合物10~80的结构包括1个环烯醚萜类化合物：valerjatadoid A （10） [16];12个倍半萜化合物：patchoulan-1, 12-diol （11） [17], valeriananoid A （12） [18], （8R） -8-acetoxypatchoulol （13） , （8R） -8-hydroxypatchoulol （14） , （8S） -8-hydroxypatchoulol （15） , patchoulol （16） , （5R） -5-hydroxypatchoulol （17） [19], （-） -alloaromadendrane-3β， 9β-diol （18） [20], germacrene B （19） [21], S （+） dehydrovomifoliol （20） [22], （E） -4- （r-1', t-2', c-4'-trihydroxy-2', 6 trimethylcyclohexyl） but-3-en-2-one （21） [23], 3S, 5R, 6R, 7E, 9S-megastigman-7-ene-3, 5, 6, 9-tetraol） （22） [24];6个单萜衍生物：p-menth-3-ene-1, 2, 8-triol （23） [25], （R） -6-hydroxy-3- （2-hydroxypropan-2-yl） -6-methylcyclohex-2-enone （24） [26], （-） -bornyl ferulate （25） [27], （-） -bornyl isoferulate （26） [28], （-） bornyl caffeate （27） , （-） -Z-bornyl caffeate （28） [27];1个二萜：phytol （29） [29];3个三萜：oleanolic acid （30） [30], ursolic acid （31） [31], obtusalin （32） [32];9个黄酮类：5-hydroxy-4', 7-dimethoxyflavone （33） [33], 4', 5-dihydroxy-7-methoxyflavone （34） [34], acacetin （35） [35], apigenin （36） [36], 6-methylapigenin （37） [37], syzalterin （38） [38], isosakuranetin （39） [39], （-） -farrerol （40） [38], sternbin （41） [40];12个木脂素类：prinsepiol （42） [41], （+） -1-hydroxypinoresinol （43） , 8-acetoxypinoresinol （44） , （+） -medioresinol （45） [42], （+） -monomethylpinoresinol （46） [43], （+） -syringaresinol （47） , （+） -pinoresinol （48） [42], （+） -5'-hydroxypinoresinol （49） [44], （+） -cyclo-olivil （50） , （-） -massoniresinol （51） [42], 4, 4', 9, 7'-tetrahydroxy-3, 3'-dimethoxy-7, 9'-epoxyligan （52） [45], （-） -berchemol （53） [46];18个简单芳香类化合物：isoferulaldehyde （54） , ferulic acid （55） , Z-ferulic acid （56） , p-coumaric acid （57） , Z-p-coumaric acid （58） , caffeic acid ethyl ester （59） , Z-caffeic acid ethyl ester （60） , p-coumaric acid n-dueicosanyl ester （61） , Z-p-coumaric acid n-dueicosanyl ester （62） , vanillin （63） , 3, 4-dihydrobenzoic acid （64） , p-hydroxybenzaidehyde （65） , p-hydroxybenzoic acid （66） , syringic acid （67） , esculetin （68） , scopoletin （69） , o-hydroxybenzoic acid （70） , benzoic acid （71） [42,47];5个异戊酸类衍生物：isovaleric acid （72） , β-methylvaleric acid （73） , α-isovaleroxyisovaleric acid （74） , β-acetoxyisovaleric acid （75） [5], isopentylβ-D-glucoside （76） [48];3个甾体类化合物：ergost-6, 22-diene-3β， 5α， 8α-triol （77） [49], β-sitosterol （78） , daucosterol （79） ;1个脂肪酸：n-hexacosanoic acid （80） .

　　5 活性测试

　　前期已发现大部分环烯醚萜具有较强的肿瘤细胞毒活性， 而且还存在一定的构效关系[5,6,7,8,9,10,11], 其中其对卵巢癌细胞抑制的作用机制是通过调控p53/MDM2及其介导的信号通路， 阻滞癌细胞于G2/M期、引发细胞的增殖抑制和细胞凋亡实现的[13].此外， 在进一步的体外肿瘤细胞毒活性筛选中， 发现化合物单萜衍生物25, 27和28对肺腺癌 （A549） , 前列腺癌 （PC-3 M） , 结肠癌 （HCT-8） 也有较强的抑制作用， IC50为2.8~10.4μmol·L-1, 而对肝癌 （Bel7402） 细胞株有弱的抑制作用， IC50为14.0~31.9μmol·L-1, 见表3.

　　【表3 化合物25, 27和28的肿瘤细胞毒活性筛选】

　　注：1） pseudolaric acid B （PAB） 作为阳性对照。

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