蛹虫草（也叫北虫草），学名为 Cordyceps militaris，虫草菌的一种，子囊菌亚门、麦角菌目、麦角菌科、虫草属的模式种[1]，现已实现人工培育多年，人工栽培蛹虫草已成为全国不少地区，带动当地经济发展，帮助农民致富的好途径。同时，蛹虫草食用和药用价值可与天然的冬虫夏草媲美，它不仅在药效成分种类上与天然冬虫夏草相近外，而且是在已报道的 350余种虫草菌中唯一能大量形成虫草素的种[1,2]，因此它与天然冬虫夏草一样，能滋补人体，而且能有效地抑制肿瘤和病毒，并具有多种药理功能，是天然冬虫夏草的最理想代用品。

　　西藏农牧科学研究院蔬菜研究所食用菌课题组，自 2009年引种栽培蛹虫草成功后，经检测发现，在高原地区栽培出的蛹虫草比内地产的同种蛹虫草在虫草素含量高，说明特殊的高原气候有助于培育优质蛹虫草。在西藏天然虫草主产区，实现资源的可持续利用，必须改变当地农牧民受市场炒作影响，过分依赖天然资源，以破坏子孙后代生存环境为代价的致富方式，转向重点发展稳定、优质、高产蛹虫草菌株及配套栽培技术的普及和推广，对于帮助农牧民致富，提升当地产业服务社会，带动当地经济发展有重要意义。

　　1、种源

　　选择适应性强、出草率高的种源，是蛹虫草栽培成功的关键，在西藏拉萨栽培多年发现，菌种经连续转管，长期冷藏保存导致菌种退化，不转色，甚至不出草，目前内地业界也频频出现这类困境。种源的质量，单从菌种表面难以鉴定，必须通过“出草”试验。经过几年的栽培试验，总结出试管固体母种，生产用液体原种，大米栽培种三级菌种扩繁体系。如图所示 :

图 1 三级菌种扩繁体系

　　1.1、原原种制备

　　在超净工作台上，酒精灯外焰处揭开封口膜，选取新鲜、生长正常、形态健壮、颜色橙黄或橘红色的栽培蛹虫草或野生蛹虫草子座，用无菌镊子取尖端，置于 PDA 试管固体斜面培养基 ( 马铃薯 200.0g，葡萄糖 20.0g，琼脂 20.0g，水 1000ml) 上，于 25℃培养 3d，剔除有杂菌污染的试管，连续观察 7~10d 直至长满整个试管斜面，如菌丝生长均匀一致，无明显白色绒毛状气生菌丝，经室内散射光照射，菌苔为橘黄色或橘红色，即为原原种 -- F0 级，如斜面生长不均匀，需进行纯化转接。

　　1.2、纯化转接

　　在超净工作台上，酒精灯外焰处用无菌接种铲挑取原原种--F0 级 0.5cm2大小菌种块，转接于平皿固体 PDA 培养基中央，18℃ ~23℃培养 7~10d，观察菌丝生长势和均匀度，留存菌丝生长均匀一致，无明显白色绒毛状气生菌丝，经室内散射光照射，菌苔为橘黄色或橘红色的平皿，转接制备试管母种--F1级。

　　1.3、控制试管母种转管次数

　　如果种源是引进的菌种，即试管母种 --F1 级，原则上应直接用于生产液体原种。但大多数从业者为了留存菌种，转接很多管，即试管母种 --F2 级用于生产液体原种，并将其一部分冷藏于 3℃ ~8℃（保存期为 3 个月），需要使用时再转接活化为试管母种 --F3 级，试管母种转管不得超过 3 次。

　　1.4、生产用液体原种制备

　　由试管母种转接，一支扩 3~5 瓶，每瓶 1cm2菌种块 3~5块，18℃ ~23℃条件下避光培养，一般往复式摇床 60 ～ 70 次/min，旋转式摇床 100 ～ 120 转 / 分钟，振荡培养时间为 4 ～6d，静置培养时间为 7 ～ 10d。菌液澄清透明，菌球在菌液中分散均匀、无上浮、无沉淀，挂瓶壁的菌丝短绒毛状，淡黄色，且有蛹虫草独有的菌香味、无异味。

　　1.5、大米栽培种制备

　　由生产用液体原种转接，一瓶扩 20~50 瓶，连续注射器，接种量 4~10ml 喷洒大米料面。18℃ ~23℃条件下避光培养，3~5d菌丝白色浓密、洁白、均匀发至瓶底，无绒毛状气生菌丝，无杂菌；培养基表面出现一些小小隆起时，增加光照，促进转色。每天通风见光时间在 10h 以上，如果光照不足，可用日光灯补光（晚上开灯，白天不开灯），相对湿度 60%~70%，维持 5~10d，料面上有小米粒状原基凸起（即原基分化），说明转色成功。转色后则应停止人工补光，不宜连续日照，否则不容易长出子座。

　　为验证分离菌种是否为所需菌种，把分离得到的菌种回接到大米培养基上进行出草试验，接种后发菌速度快，无杂菌，能转色、分化原基至子座成熟，整个周期不超过50~60d，出草整齐，草型好（直立无簇生），生物转化率高（每瓶鲜草 >10g）。

　　2、培养基制备

　　培养基的质量决定出草产量和品质。合理的基质碳氮比(C/N) 是人工栽培北虫草的必需条件，否则，将导致或者菌丝生长缓慢、或者污染严重、或者气生菌丝过旺，难以发生子座，即便有子座分化，其产品数量和质量均有不同程度的下降。生产中一般以调在 C/N 3~4:1 之间为宜[1,2]。

　　2.1、试管固体

　　母种（F1 级以上）培养基配制与分装培养基配方：马铃薯 200.0g，葡萄糖 20.0g，蛋白胨10.0g，磷酸二氢钾 3.0g，硫酸镁 1.5g，维生素 B110.0mg，琼脂 20.0g，水 1000ml，pH 值 6.0 ～ 7.0。

　　培养基配制与分装：按配方称好各种原料，将马铃薯洗净去皮去芽眼（出芽、变绿禁用），称取200g，切成3～5mm薄片，加水 1000ml，文火煮沸 20 ～ 30min，用 4 层纱布过滤，滤液放回锅内，加入琼脂充分溶化，再依次加入其它成分，搅拌溶解后，加开水补足至 1000ml，趁热分装试管，装量为试管的1/4 ～ 1/5，塞入胶塞。

　　2.2、生产用液体原种培养基配制与分装

　　培养基配方：马铃薯 200.0g，葡萄糖 20.0g，蛋白胨10.0g， 酵 母 膏 5.0g， 磷 酸 二 氢 钾 3.0g， 硫 酸 镁 1.5g， 水1000ml，pH 值 6.0 ～ 7.0。

　　培养基配制与分装：按配方称好各种原料，将马铃薯去皮去芽眼，称取 200g，切成 3 ～ 5mm 厚的薄片，文火煮沸 20 ～30min，用 8 层纱布过滤，滤液用开水补足至 1000 毫升，再依次加入其它成分，搅拌溶解，然后装入三角瓶或玻璃输液瓶中，液体装量不宜超过容器总容积的 2/5，瓶口用硅胶塞或乳胶圈封口。

　　2.3、大米栽培种培养基配方

　　大米营养液配方：葡萄糖 10g，蛋白胨 10g，蚕蛹粉 10g，磷酸二氢钾 3g，硫酸镁 1.5g，维生素 B110mg，水 1000ml，pH值 6.0 ～ 7.0。

　　分装：按配方称好各种原料，充分搅拌使其溶化，文火煮沸 20 ～ 30min，用 8 层纱布过滤，分装于洗净的罐头瓶中，每瓶装 25~30ml, 每瓶加入生大米 20~25g，培养基装瓶后，一般用聚丙烯塑料薄膜封口，外套橡皮圈。

　　2.4、培养基制作需注意的问题

　　料水比不大于 1:1.5，料水比太大，会影响菌丝呼吸作用容易早衰；太小，菌丝吃不透料，后期营养不够而抑制生长；pH 值，蛹虫草适酸性环境，菌丝生长阶段适应 5~7 的基质，最适 5.2~6.8 之间，人工栽培生产时，基质 pH 可调到 7~7.5，经高压灭菌后，pH 值自然下降，菌丝的生长（产生有机酸）自然调节，可使基质 pH 降至 6 左右。

　　3、灭菌

　　拉萨市海拔 3650m，低气压导致水的沸点只有 86℃，本地食用菌栽培户多采用常压蒸汽灭菌，灭菌时间至少保持在36h 以上，栽培袋里的栽培料才能蒸透，大米栽培瓶很难在常压下蒸透蒸熟，费时费力，燃料成本不可避免；采用高压灭菌，速度快，灭菌彻底，但高压灭菌锅投资大，单次灭菌数量少，连续工作量大，一般试管种固体培养基和液体种培养基均在高压锅灭菌，灭菌温度 121℃ ~126℃，时间保持 30min；为此，采用中压灭菌方法在高原低压地区较为实际，灭菌温度110℃ ~115℃，大米不像麦子，容易吸水，不易松动，随着灭菌量的加大，相应延长灭菌时间，灭菌时间不得少于4h。另外，灭菌时应注意装瓶不能过紧，要留有一定的空隙度，使蒸汽流畅而不产生死角，灭菌彻底。

　　4、接种

　　接种必须在无菌状态下进行。连续注射器硅胶管用高锰酸钾浸泡过夜。在超净工作台上操作，连续注射器（忌高压灭菌）用高锰酸钾、75% 酒精、无菌水依次过滤，硅胶管一头插入三角瓶液体菌种液面以下，接种针在酒精灯外焰灼烧，晾凉，打出空气，初始液体菌种废弃，插入接近瓶口边缘，注射器喷嘴向下，让液体菌种均匀喷洒大米料面，一般连续注射器为 2ml为一次注射量，每瓶不超过 5 次注射即可，过多会在瓶底积水，不利于菌丝向下延展。

　　5、菌丝培养

　　必须避光培养，最适菌丝生长温度为 18℃ ~23℃，经3~7d 大米培养基菌丝长满至瓶底。如条件许可，通过 2~3d 的日光灯昼夜人工补光，或利用拉萨日光资源，将大米栽培瓶移至光线较强的地方使菌丝迅速转色，料面呈橘黄色或橘红色为正常。

　　拉萨气候冷凉，夏无酷暑，冬无严寒，每年 5 月 ~10 月期间非常适合菌丝培养，因拉萨气候干燥，适当注意培养室加湿保湿。蛹虫草是一种介于好气菌与嫌气菌之间的一种真菌[2]。因此，在各级菌种扩繁过程中，注意菌丝培养的空间空气新鲜，西藏本来地处高海拔低气压地区，空气含氧量绝对低于其他地区，如不注意通风换气，极易发生气生菌丝或营养生长过旺，菌丝早衰，不易出草。

　　6、出草管理

　　转色成功后，松动瓶口封口膜，但不揭开封口膜，以利增氧，或封口膜上扎孔（孔径不超过 2mm，1~3 个即可）通气，并加强室内通风，保持新鲜空气，同时应减少光照时间，利用室内自然散射光即可；保持室内温度在 20℃ ~25℃，适当调控温差在 24h 内 5℃ ~10℃的范围，控制相对湿度在 65%~85%，否则将会使料面产生过多的气生菌丝，不利于出草。子实体刚出现时，是形如小米粒的橘黄色原基，此时注意地面保湿和墙壁保湿，在四周、通风窗口挂湿帘并喷透水，若在温室大棚和其他吊蔓蔬菜作物套种栽培，保湿效果很好。3~5d 后，原基逐渐伸长，最后形成下粗上细的橘黄色棒状子座，成熟时顶端开始膨大。当子座了出现萎缩时，就不再生长，即可采收。

　　7、栽培方式

　　合理的培养方式是降低成本和提高品质的关键。内地的栽培户基本上都还是采用瓶栽，而瓶栽的成本中人工占主要比例，从开始栽培到采收，要经过洗瓶 -- 装料 -- 封口 -- 灭菌 --接种 -- 上架 -- 取口 -- 采收，每个环节都要一瓶一瓶的做，特别是在每瓶的小空间采收，都需要大量的人工[2]。

　　在西藏，适合庭院式出草管理，盆栽或盒栽等大料块栽培方式较为实际。只需把握好灭菌和接种环节，培养基因颗粒间比较疏松，就发菌快，吃料均匀，菌丝粗壮活力强，感染率低。后期管理开放式，空间大，氧气充足，原基分化的好，草长的密、粗、长。

转色不好的菌种

正常的菌种

液体菌种静置培养

液体接种（连续注射器）

　　参考文献
　　[1] 黄年来 , 林志彬 , 陈国良等着 . 中国食药用菌学 [M]. 上海科学技术文献出版社 .2010 年 .1761-1769.
　　[2] 唐葡萄 . 北虫草栽培如何降低成本提高品质 [J]. 食用菌 .2007(1)

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