摘要:本文就对猪圆环病毒病(PCVD)的临床诊断、实验室诊断、病理学诊断等进行综述,为临床PCVD确诊提供参考.

关键词:猪圆环病毒;诊断技术;研究进展

PCV2是一种单股DNA、环状、共价闭合、二十面体对称、小而无囊膜病毒,是目前已知最小的动物病毒,病毒粒子平均直径为17nm.猪感染PCV2后,会引起妊娠母猪的繁殖障碍、猪呼吸道疾病综合征(PRDC)、皮炎肾衰综合征(PDNS)、断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、仔猪先天性震颠(CT)等[1].猪对PCV2有很强的易感性,病毒可以通过感染猪的粪便、鼻液等排泄物排出,然后再通过呼吸、口腔等传播途径感染不同年龄的猪.

1 临床诊断技术

感染PCV2后会引起许多疾病,但不同年龄阶段的临床表现均不同,其中PRDC多发生于病猪肥育阶段,病猪表现为生长减慢、被毛粗糙、皮肤苍白、腹式呼吸、间断性咳嗽、猪群整体度变差等.PDNS发生于肥育阶段猪只,在炎热季节会多发,后躯皮肤、耳部、背部会出现圆形不规则的丘疹或不规则型红斑或圆形,后期会发展为黑色结痂.PMWS主要发生于断奶后5~10周龄的猪仔,临床表现为气喘、咳嗽、逐渐消瘦、皮肤苍白、食欲减退等.CT多发生于刚出生的小猪,在出生后几小时内会出现共济失调、震颤等.

2 病理剖检诊断

解剖发现猪感染PCV2后,病变最显着的就是全身淋巴结肿大,其中肠系膜淋巴结和腹股沟淋巴会肿大2~5倍.肺部有散在隆起的橡皮状硬块,严重者会导致肺泡出血,尖叶和心叶会有暗红色斑块.

3 实验室诊断技术

3.1 病毒分离鉴定

该方法是采集病死猪组织研磨成悬液,然后在-20℃的条件下反复冻融、离心取上清液、滤器除菌,然后接种已长成单层且无PCV污染的PK-15细胞,再经过一系列的步骤进行核酸或PCV2的检测加以鉴定,该方法很费时和费力,不能快速做出诊断.

3.2 免疫学方法

3.2.1 间接免疫

荧间接免疫荧方法不仅可以检测抗体,还可以用已知PCV特异性抗体检测抗原,所以间接免疫荧方法主要用于猪源细胞PCV污染情况的普查和PCV的分离鉴定.

3.2.2 免疫组织化学

免疫组织化学方法(IHC)是在抗原抗体特异反应存在的前提条件下,利用酶细胞化学的手段,检测某种物质在组织细胞内存在的部位.该方法的优点是能对携带抗原的细胞及组织的大体形态进行评价,结合形态病变能快速、特异的进行诊断,而且样本也容易保持.

3.2.3 酶联免疫吸附试验

该方法主要是利用聚酶链式反应(PCR)进行病原学检测,但是PCR的高敏感性常会导致假阳性结果,酶联免疫吸附试验方法(ELISA)具有敏感性高、特异性强、诊断速度快等优点,可以进行普及,适合大规模检测.

3.2.4免疫胶体金检测技术

该方法对PCV2免疫血清具有极高的特异性,而且对其他病毒免疫血清无交叉反应,免疫胶体金检测技术和上诉ELISA的检测灵敏度相近.

3.3 分子生物学检测技术

3.3.1 PCR诊断技术

PCR是一种简便、特异、快速的诊断方法,能直接对病毒核酸进行检测,临床中的PCR方法包括PCR限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)、荧光定量PCR(FQ-PCR)、套式PCR、常规PCR等.

3.3.1.1常规PCR

此种方法是按照Genbank发表的PCV2的基因序列设计1对PCV2特异引物,如果在患猪种扩展PCV2特异的基因组片段,就说明已经感染PCV2,该方法具有较高的敏感性和特异性.

3.3.1.2 套式PCR

此方法解决了细胞和组织病料中的PCV2含量太少,不能检测到PCV2基因组存在的特点,王贵平[3]等人通过套式PCR检测发现,套式PCR对于PCV2的敏感性比常规PCR更高.

3.3.1.3 荧光定量PCR

FQ-PCR是在PCK反应体系中加入荧光基团,最后通过准曲线对未知模板进行定量分析的方法,该方法的灵敏度、特异性、稳定性良好,在检出阳性率方面高出传统方法的14.3%.

3.3.1.4 PCR限制性片段长度多态性分析法

PCR-RFLP是一种多态性分析的方法,该方法分考虑了引物序列在不同毒株间的酶切位点和保守性的特异性,可以对不同地区来源的毒株进行分型检测.

3.3.2 原位杂交技术(ISH)

ISH是由细胞学、组织化学、分子生物学相结合组成的技术,敏感性很高,能精确定位RNA、PRRSV DNA、PCV在细胞中的部位已经特点.

3.3.3 基因芯片检测技术

该技术是由微电子学和分子生物学等多种学科融合成的高科技技术,能准确鉴别PCV基因型,能同时检测出PCV2、CSFV、PRRSV感染,灵敏度是凝胶电泳的5倍,具有可重复、特异性强、高灵敏度等优点.

4 结束语

现今PCV-2已经在全球范围内大量发生和流行,给养猪行业构成了严重威胁,也造成了巨大的损失,引起国内外学者广泛关注.所以,建立一种适合临床推广、经济、实用、灵敏、简单的快速检测方法是目前主要的研究方向.但是目前虽然PCV2的检测方法很多,但是均存在很多的局限性,为此需要结合具备的条件,根据试验的目的选择最合适的检测方法来对PCVD进行检测.

参考文献

[1]郭小参,党占国,杜根成,等.猪圆环病毒病诊断技术研究进展[J].养猪,2015,(06):24-25.

[2]聂立欣,罗满林,孔小明,等.猪圆环病毒感染后部分免疫器官的组织化学检测[J].动物医学进展,2006,27(1):58-61.

[3]王贵平,蒋智勇,宋长绪,等.猪圆环病毒2型套式PCR检测方法的建立及应用[J].中国兽医科学,2004,34(10):26-28.

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